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Das Prinzip der spiralförmigen exponentiellen Beschichtung
Die Spiral-Plating-Technik ist eine standardisierte Methode der Auszählung durch Ausplattieren, die die Pasteur-Methode vereinheitlicht.
Eine Probe wird mit einer Präzisionsspritze in einer logarithmisch abnehmenden archimedischen Spirale von der Mitte der Schale zum Rand hin auf die Oberfläche einer rotierenden Petrischale aufgebracht. Sie ermöglicht vier Verdünnungsprotokolle auf der gleichen Schale und bietet eine Ausbreitung durch Erschöpfung. Das Volumen ist kalibriert und an allen Punkten der Petrischale bekannt.
Bei der Referenzmethode werden vier aufeinanderfolgende Verdünnungen vorgenommen und die vierte Verdünnung wird ausplattiert, um eine interpretierbare Petri-Schale zu erhalten. Die Spiraltechnik ermöglicht es uns, die Mutterprobe direkt zu beimpfen.
Die manuelle Ausplattierung ist eine Methode mit sich wiederholenden Vorgängen: mindestens 4 Verdünnungen und 4 aufeinanderfolgende Ausplattierungen, um nur eine auswertbare Petrischale zu erhalten.
Mit dieser Methode können Sie Ihre Analyse mit nur einer einzigen Petrischale durchführen!
Vergleich zwischen der klassischen Methode und der Spiralplattierungstechnik
Die Spiraltechnik ist ein Verfahren zur Oberflächenbeschichtung. Sie ähnelt den horizontalen Methoden, die üblicherweise in Labors verwendet werden. Im Vergleich zu den Referenzmethoden zeigen Laborvergleichstests wie RAEMA, dass es keine statistisch signifikanten Unterschiede zwischen beiden Methoden gibt.
Hier wird eine vergleichende Studie zwischen der Referenzmethode und der Spiralplattierungstechnik durchgeführt:
Ziel: Untersuchung der Zuverlässigkeit der easySpiral / easySpiral Pro-Plattierung im exponentiell abnehmenden Modus (genannt Spiral-Plattierungsverfahren) durch Durchführung einer Vergleichsstudie mit der Referenzmethode "manuelle Oberflächenplattierung" (genannt klassische Methode).
Schlussfolgerung: Unsere Ergebnisse zeigen, dass es eine starke Korrelation (R2 = 0,989) zwischen der mit easySpiral durchgeführten Spiralplattierungstechnik und der klassischen Methode gibt. Auch der durchschnittliche Unterschied in log KBE/ml zwischen den beiden Methoden ist 12-mal geringer als der maximale Unterschied, also nicht signifikant.
Korrelationslinie zwischen der Escherichia coli-Zahl (in Log KBE/ml), die durch Ausplattieren mit der Spirale und mit herkömmlichen Methoden erhalten wurde
Beispiel für unterschiedliche Konzentrationen von Escherichia coli, die mit Hilfe der Spiralausstrichtechnik auf MacConkey-Medium ausplattiert wurden
2,6 x 103
1,3 x 104
2,6 x 104
1,3 x 105
2,6 x 105
Ist die Spiralplattierungstechnik standardisiert?
Ja, es handelt sich um ein Standardverfahren, das unter ISO 7218 oder ISO 4833-2 für die Auszählung der gesamten mesophilen Flora aufgeführt ist. Außerdem ist sie auch auf dem amerikanischen Markt bei der FDA und der AOAC vertreten.
Aus ISO 4833-2: “Dieser Anhang legt ein Verfahren zur Auszählung von Mikroorganismen in Lebensmitteln, Futtermitteln und Umweltproben unter Verwendung eines Spiralplattierers fest.”
Von der FDA - BAM: “Die Spiralplattenmethode (SPLC) für Mikroorganismen in Milch, Lebensmitteln und Kosmetika ist eine offizielle Methode der APHA und der AOAC.”
Wie soll man zählen?
Die Bakterienkonzentration wird bestimmt, indem die Anzahl der gezählten Kolonien durch das ausplattierte Volumen pro Sektor dividiert wird. KBEs können entweder manuell (mit einem Abakus oder einem manuellen Koloniezähler) oder automatisch mit einem automatischen Koloniezähler Scan gezählt werden.
Manuelle Methode
Das Ablesen der Spiralplattierungstechnik erfordert einen Abakus, der mit dem easySpiral-Plattierer geliefert wird.
Dieser Abakus ist in 4 Quadranten unterteilt: A | A | B | B. Jeder Quadrant ist in 6 Sektoren unterteilt.
Zählen Sie 20 Kolonien, beginnend mit Sektor 1 (dem am stärksten verdünnten Sektor), und setzen Sie dann die Zählung fort, bis mindestens 20 Kolonien erreicht sind, und beenden Sie die Zählung aller Kolonien in diesem Sektor.
Vervollständigen Sie die Zählung des Sektors, in dem sich die 20. Kolonie befindet.
Zähle die Kolonien in denselben Sektoren des gegenüberliegenden Quadranten.
Addieren Sie die Anzahl der Kolonien dieser beiden Zifferblätter: (n1 + n2) = N
Teilen Sie N durch das Volumen der gelesenen und gezählten Sektoren: V (vom Lieferanten angegebene kumulative Volumina).
Erforderlichenfalls mit einem Verdünnungsfaktor multiplizieren: D
Umrechnung von µL in mL durch Multiplikation mit einem Faktor von 1000.
Bakterielle Konzentration: C in KBE/ml.
Alternative Methode
Anstelle der Spiralformel können Sie auch die Anhänge des Benutzerhandbuchs verwenden.
Tabelle der Ergebnisse
Automatische Methode
Interscience bietet eine Reihe von Koloniezählern an, die eine automatisierte Auszählung von der Spiraltechnik auf automatisierte Weise zu zählen.
Inkubation und Zählung in Echtzeit
ScanStation 100 | ScanStation 200 | ScanStation 300
Spiralplattierungsverfahren: 45 Jahre Erfahrung
Seit 45 Jahren sind die automatischen Spiralplattierer von Interscience eine Referenz für Lebensmittel-, Medizin-, Forschungs-, Kosmetik-, Pharma- und Probiotiklabors weltweit.
1973
Dr. Ed Campbell, ein Forscher bei der FDA (Food and Drug Administration) in Cincinnati, USA, erfand die Spiralplattierungstechnik für die Probenplattierung.
1979
Einführung des Plattierers
Spiral DS
1992
Dr. Ed. Campbell und François Jalenques, Gründer von Interscience, patentieren gemeinsam eine aktualisierte Version der Spiralplattierungstechnik.
1996
Einführung der Spiral DS +
Galvanisiermaschine
2010
Interscience bringt easySpiral und easySpiral Pro mit einer völlig neuen Architektur auf den Markt: schneller und einfacher in der Anwendung.
2020
Veröffentlichung von easySpiral Pro Milk, das die umfassendste Produktpalette auf dem Markt erweitert.
Häufig gestellte Frage
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Muss ich meinen Medienanbieter wechseln?
Die Verbrauchsmaterialien sind nicht unverlierbar, es besteht also keine Verpflichtung, den Medienlieferanten zu wechseln. Allerdings sollten die Medien zwischen 12 und 15 Gramm pro Liter Agar enthalten. Das Interscience easySpiral verfügt über ein Gegengewicht auf dem Gerät, das den Stift hält, so dass es an alle Agararten angepasst werden kann, auch an solche, die von Hand gegossen werden.
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Muss ich in einer sterilen Umgebung arbeiten?
Bei der Spiralplattierungstechnik wird empfohlen, in einer sterilen Umgebung, unter einer mikrobiologischen Sicherheitswerkbank (BSC) oder in einer Laminar-Flow-Haube zu arbeiten. Für Labore, die nicht die Möglichkeit haben, unter diesen Bedingungen zu arbeiten, empfehlen wir, den Automaten in der Nähe eines Bunsenbrenners aufzustellen. Interscience bietet auch einen Gehäuseschutz an, der auf die easySpiral aufgesetzt werden kann, um einen Luftstrom auf der Arbeitsplattform zu verhindern.
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Welche Mikroorganismen können ausgeplattet werden?
Alle Mikroorganismen, die normalerweise auf der Oberfläche plattiert werden, können nach Validierung durch das Labor mit der Spiralplattierungstechnik plattiert werden. -
Wie viele Verdünnungen werden bei der Spiralplating-Technik berücksichtigt und visualisiert?
Die Spiral-Plating-Technik ermöglicht das Äquivalent von 4 Verdünnungsprotokollen auf derselben Petrischale: die Mutterprobe und drei aufeinanderfolgende Verdünnungen dieser Probe. Die Spiralverdünnungen werden durch Ausbreitung eines linear abnehmenden Volumens des Inokulums in einer archimedischen Spirale sichtbar gemacht, die in der Mitte hoch konzentriert ist und am Rand viel weniger.
-
Was sind die Anwendungsbereiche der Spiralplattiertechnik?
Die Spiralplattierungstechnik kann in verschiedenen Anwendungsbereichen eingesetzt werden, z. B. in der Lebensmittelverarbeitung für die Auszählung von Qualitätskriterien in allen Matritzen, auch in gefärbten Matrices oder in Milch als Rohstoff. Sie kann auch für bakterielle kinetische Studien verwendet werden. Die Spiralplattierungstechnik kann in der Pharmakologie oder Kosmetologie für anspruchsvolle Tests, F&E, Qualitätskontrolle und Fruchtbarkeits-/Sterilitätstests eingesetzt werden.
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Was sind die Vorteile der Spiralplattiertechnik?
Die Spiralplattierungstechnik hat mehrere Interessen:
- Standardisierung der Pasteur-Methode
- Kontrolle der Kosten für die Beschaffung von nicht lagerfähigen Medien/Verbrauchsmaterialien
- Verringerung der Bestände an immobilisierten Medien
- Erhaltung des wissenschaftlichen Fachwissens im Labor
- Freiheit, jeden Parameter im Labor mit der Spiralplattierungstechnik zu validieren
- Kompatibel mit allen Arten von Proben, auch gefärbten
- Schnellere Probenverarbeitung in kürzerer Zeit.
-
Auf welche Hygienekriterien können wir bei der Spiralplattierungstechnik achten?
Die mit der Spiralausstrichtechnik akzeptierten Kriterien hängen von den Nachweisschwellen ab. Jedes Kriterium über 100 KBE kann verwendet werden (vorbehaltlich der Validierung durch das Labor), mit Ausnahme von strikten Anaeroben, die in Doppelschichten beimpft werden müssen. In wissenschaftlichen Studien wird die Spiralplattierungstechnik im Labor geschätzt und anerkannt.
